A diagnose da meleira do mamoeiro (Carica papaya)tem sido feita mediante observação de sintomas que aparecem principalmente nos frutos ou pela detecção de dsRNA de cerca de 12 kb, purificado a partir do látex em coluna de CF11, em gel de agarose ou poliacrilamida. Os sintomas nos frutos são tardios e permitem longa permanência de plantas infectadas no campo e o processo usado para detectar dsRNA é laborioso, não se prestando a detecção em larga escala. Visando disponibilizar protocolos de diagnose precoce da meleira que possam ser usados em larga escala, o presente trabalho apresenta dois métodos de detecção relativamente baratos, rápidos e que permitem o manuseio de dezenas de amostras por dia. Os dois métodos utilizam o látex extraído dos frutos, folhas ou caule de plantas, e se baseiam na extração e visualização de ácidos nucléicos. A presença do vírus é confirmada pela visualização do seu dsRNA em gel de agarose (1%) em 1X TBE. Com esta técnica temos conseguido resultados confiáveis a ponto de diagnosticar precocemente a meleira em plantas ainda jovens e em plantas assintomáticas.

Papaya sticky disease was first reported affecting papaya (Carica papaya) in Brazil in the late 80s. Today this disease is found in the papaya production areas throughout Brazil, and in some of them it became the main limiting factor for the papaya industry. The primary disease symptom is an excessive exudation of highly fluid latex that becomes dark as result of oxidation and turns the fruit unmarketable. It is caused by a new virus that has an isometric particle (40-50 nm in diameter), and a unique 12 kb long dsRNA molecule. Since its diagnosis is done mainly by observation of the symptoms on the fruit, infected plants may be source of inoculum for several months before diagnosis. Another form of diagnosis is the detection of dsRNA from leaves and latex using CF11 columns. This is a laborious system not suited to large scale usage. The present work presents two cheap and fast diagnostic protocols. These protocols use latex obtained from fruits, leaves and stems, and are based on the extraction and visualization of nucleic acids. Presence of the virus is confirmed by the visualization of dsRNA on agarose (1%) gel in 1X TBE. Using these protocols it is possible to confirm the presence of the virus in young and assymptomatic plants.

O Papaya ringspot virus (PRSV) é o agente causal da mancha anelar, principal doença do mamoeiro (Carica papaya) no mundo. O Brasil é o maior produtor desta fruteira, sendo responsável por aproximadamente 40% da produção mundial. A resistência a este vírus, obtida em mamoeiros transgênicos expressando o gene da proteína capsidial (cp) do PRSV, mostrou-se dependente do grau de homologia entre a seqüência do transgene expresso pela planta e o gene cp do vírus invasor, de forma isolado-específico. Dessa forma, quando se objetiva produzir mamoeiros transgênicos com amplo espectro de resistência ao PRSV, é importante o conhecimento do grau de homologia deste gene entre os diversos isolados presentes em uma área geográfica específica onde o mamoeiro será cultivado. O objetivo do presente estudo foi avaliar o grau de homologia entre o gene cp de diversos isolados brasileiros de PRSV. O mamoeiro e o PRSV encontram-se presentes em diversos ecossistemas brasileiros. Doze isolados de PRSV, coletados em oito estados de quatro regiões geográficas, foram utilizados neste estudo. As seqüências do gene cp destes isolados foram comparadas entre si e com o gene utilizado para gerar mamoeiros transgênicos para o Brasil. Um grau de homologia médio de 97,3% para as seqüências de nucleotídeos foi observado entre os isolados brasileiros. Quando comparado com 27 isolados de outras regiões, em uma árvore de homologia, os isolados brasileiros foram agrupados com os isolados australianos, havaianos, e os da América Central e do Norte. Um grau de homologia médio de 90,7% foi observado entre os 40 isolados analisados.

Papaya ringspot virus (PRSV) is the causal agent of the main papaya (Carica papaya) disease in the world. Brazil is currently the world's main papaya grower, responsible for about 40% of the worldwide production. Resistance to PRSV on transgenic plants expressing the PRSV coat protein (cp) gene was shown to be dependent on the sequence homology between the cp transgene expressed in the plant genome and the cp gene from the incoming virus, in an isolate-specific fashion. Therefore, knowledge of the degree of homology among the cp genes from distinct PRSV isolates which are present in a given area is important to guide the development of transgenic papaya for the control of PRSV in that area. The objective of the present study was to assess the degree of homology among the PRSV cp genes of several Brazilian isolates of this virus. Papaya and PRSV are present in many different ecosystems within Brazil. Twelve PRSV isolates, collected in eight different states from four different geographic regions, were used in this study. The sequences of the cp gene from these isolates were compared among themselves and to the gene used to generate transgenic papaya for Brazil. An average degree of homology of 97.3% at the nucleotide sequence was found among the Brazilian isolates. When compared to 27 isolates from outside Brazil in a homology tree, the Brazilian isolates were clustered with Australian, Hawaiian, and Central and North American isolates, with an average degree of homology of 90.7% among them.

As viroses constituem o principal grupo de doenças do mamoeiro (Carica papaya), ocasionando grandes perdas na produção, podendo chegar à destruição total das plantações afetadas. Embora mais de dez vírus tenham sido constatados infetando naturalmente o mamoeiro, em todo o mundo, no Brasil, até o presente, foram assinaladas apenas as ocorrências do vírus da mancha anelar do mamoeiro (Papaya ringspot virus, PRSV), do vírus do amarelo letal do mamoeiro (Papaya lethal yellowing virus, PLYV) e do vírus da meleira que se encontra em fase de caracterização. A mancha anelar causada pelo PRSV é, inquestionavelmente, o mais importante problema sanitário do mamoeiro. O controle do PRSV mostra-se imprescindível, apesar de bastante difícil, em razão da sua forma de disseminação rápida e eficiente por diversas espécies de afídeos e ausência de resistência genética em C. papaya. Na tentativa de controlar o PRSV, várias medidas já foram testadas, não existindo, até o momento, nenhuma estratégia eficiente e duradoura para seu controle no Brasil. O desenvolvimento de plantas transgênicas de mamoeiro expressando o gene da capa protéica (cp) do PRSV, imunes ao mesmo, abriu nova possibilidade para solução do problema.

The major disease problems affecting papaya (Carica papaya) throughout the world are caused by viruses. These diseases cause serious reductions in fruit production, even totally destroying affected orchards. Although more than ten different viruses have been registered in papaya world-wide, only three have been identified to date that naturally infect papaya in Brazil: Papaya ringspot virus (PRSV), Papaya lethal yellowing virus (PLYV) and the "meleira" steak disease virus that is being characterized. Ringspot caused by PRSV is unquestionably the most important disease affecting papaya in the world. Control of PRSV in Brazil is necessary but not easy, because it is efficiently transmitted by different aphid species and the absence of resistance in C. papaya. Several measures to control PRSV have been tested in Brazil without great sucess. There is no efficient and durable strategic control available. The development of transgenic papaya plants expressing the PRSV coat protein gene (cp), immune to the virus, has opened up a new efficient and probably, more durable control measure.